بهبود بیان پروتئین اینترفرون بتای انسانی در سیستم بیان گذرای سلول های cho dg۴۴ با ایجاد یک تغییر در اولویت کدونی توالی ناپایدار کننده ی انتهای ژن اینترفرون بتا (crid)
نویسندگان
چکیده
مقدمه: بهینه سازی تولید اینترفرون بتا در سلول های cho (chinese hamster ovary) به عنوان یک میزبان بیانی که قادر به تولید پروتئین دارویی با کیفیت بالا می باشد، جهت کاهش قیمت و سرعت تولید این پروتئین نوترکیب دارویی از اهمیت زیادی برخوردار است. هدف این مطالعه، بررسی تأثیر پایداری mrna به واسطه ی ایجاد یک تغییر در اولویت کدونی در ناحیه ی ناپایدارکننده ی انتهای پروتئین اینترفرون بتا (crid یا coding region instability determinant) و بررسی اثر این موتاسیون ها بر روی میزان بیان گذرای سلول های cho به عنوان فاکتوری در راستای بهبود بیان ژن بود. روش ها: با استفاده از جدول اولویت کدونی (هامستر چینی) cricetulus griseus 4 موتاسیون مورد نیاز برای ایجاد یک اولویت کدونی در توالی crid ژن اینترفرون بتای انسانی طراحی شد. با روش soeing pcr (polymerase chain reaction-splicing by overlapping extension) در ناحیه ی crid از ژن اینترفرون بتا موتاسیون های مورد نظر ایجاد شد و به وسیله ی کیت ®express in درون سلول های cho ترانسفکت گردید. میانگین میزان اینترفرون بتای تولید شده توسط سلول های cho ترانسفکت شده با ژن موتانت اینترفرون بتا با استفاده از کیت elisa مخصوص این ماده با میانگین میزان اینترفرون بتای تولید شده توسط سلول های cho ترانسفکت شده با ژن طبیعی مقایسه گردید. یافته ها: موتاسیون های انجام شده به وسیله ی بررسی ژل و توالی یابی قطعات حاصل تأیید گردید. موتاسیون های حاصل جهت ایجاد یک اولویت کدونی در توالی crid پس از تراسفکت کردن ژن موتانت در سلول های cho سبب افزایش معنی دار 9/2 برابری (05/0 > p) در میزان اینترفرون بتای تولید شده توسط سلول های cho ترانسفکت شده با ژن موتانت نسبت به میزان اینترفرون بتای تولید شده توسط سلول های cho ترانسفکت شده با ژن طبیعی گردید. نتیجه گیری: موتاسیون های مدنظر با موفقیت انجام گردید و نشان داده شد که انجام این جهش ها در توالی ناپایدار کننده ی انتهایی crid می تواند به صورت معنی داری باعث افزایش پایداری و در نتیجه افزایش غلظت اینترفرون تولید شده در محیط کشت شود. این موتاسیون ها جدید بودند و تأثیر قابل توجه آن ها نیز به اثبات رسید. در مجموع، نتایج این تحقیق جالب توجه و کاربردی به نظر می رسد.
منابع مشابه
انتقال وکتور psvm حاوی ژن نوترکیب اینترفرون بتا به سلول های dhfr- cho و بررسی بیان ژن اینترفرون بتا با استفاده از روش real time pcr
اینترفرون ها نخستین بار در سال 1957 شناسایی گردیده و واژه ی اینترفرون فعالیت زیستی مواد محلولی را تعریف نموده که در فرایند همانندسازی ویروس ها تداخل ایجاد می نمایند. اینترفرون ها در پاسخ به انواع آنتی ژن ها از جمله rna ویروسی، تولیدات باکتریایی و پروتئین های توموری بیان می گردند. به طور کلی اینترفرون ها را بر اساس توالی اسیدآمینه ای به سه گروه ifn?، ifn? و ifn? تقسیم می کنند. اینترفرون ها واجد ...
کلونینگ و بیان ژن اینترفرون آلفاb2ی انسانی در سیستم بیانی اشرشیاکلی
زمینه و هدف: اینترفرون‌ها وسیلة دفاعی بدن علیه ویروس‌ها هستند که به سرعت در بدن تولید شده، سلولهای اطراف را به تولید پروتئین‌هایی که تکثیر ویروس را مهار، یا پاسخ ایمنی و رشد سلولی را کنترل می‌کنند، تحریک می‌کنند. با توجه به اهمیت دارویی اینترفرون آلفا b2 انسانی در ایران و جهان، تولید این دارو در داخل کشور و از طریق بیوشیمیایی امکان‌پذیر اما بسیار مشکل می‌باشد. زیرا تولید این ...
متن کاملتهیه سازه‌های مناسب به‌منظور بیان ژن اینترفرون گامای انسانی در Leishmania tarentolae
Background and Objective: The aim of the present study was to express recombinant human interferon-gamma in Leishmania tarentolae. The Leishmania expression system represents the combination of easy handling known from bacterial expression systems with the potential of a eukaryotic protein expression, folding and modification system. The trypanosomatid protozoan host Leishmania tarent...
متن کاملاثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین
Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...
متن کاملاثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین
Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
مجله دانشکده پزشکی اصفهانجلد ۳۰، شماره ۱۸۲، صفحات ۰-۰
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023